DBS22 008-2013 食品安全地方标准 水产品中呋喃唑酮代谢物(AOZ)的测定 ELISA法
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ID： |
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文件大小(MB)： |
0.23 |
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页数： |
5 |
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日期： |
2013-10-9 |
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DBS22,吉林省地方标准,DBS22/008-2013,食品安全地方标准,水产品中呋喃唑酮代谢物,（AOZ）的测定 ELISA 法,2013 -10-08 发布 2013-10-08 实施,吉林省卫生厅 发布,DBS22/008—2013,I,前 言,本标准起草单位：长春市水产品质量安全检测中心,本标准主要起草人：闫先春、杨炳坤、杨立军、王雅倩、修磊,DBS22/008—2013,1,食品安全地方标准,水产品中呋喃唑酮代谢物(AOZ)的测定 ELISA 法,1 范围,本标准规定了水产品中呋喃唑酮代谢物（3-amina-2-oxazolldinone,AOZ）的酶联免疫测定方法,本标准适用于水产品的快速筛选检测,本标准的检出限为0.1 μg/kg,2 规范性引用文件,下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文,件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件,GB/T 6682 分析实验室用水规则和试验方法,SC/T 3016-2004 水产品抽样方法,3 原理,利用ELISA抗原抗体的特异性反应，样本中残留的AOZ经衍生化后和酶标板上预包被的偶联抗原竞,争呋喃唑酮代谢物的衍生物抗体，加入酶标二抗显色后，样本吸光值与其所含残留物AOZ的含量成负,相关，外标法定量,4 试剂与材料,除另有规定外，所用试剂均为分析纯，试验用水符合GB/T6682一级水的标准,4.1 乙酸乙酯,4.2 正己烷,4.3 磷酸氢二钾（K2HPO43H2O）,4.4 浓盐酸,4.5 氢氧化钠,4.6 磷酸氢二钾溶液（0.1 moL/L）:称取22.8 g 磷酸氢二钾，1000 mL 水溶解混匀,4.7 1 moL/L 盐酸溶液:量取8.3 mL 浓盐酸加入水定容至100 mL,4.8 1 moL/L 氢氧化钠溶液: 称取4.0 g 氢氧化钠加100 mL 水溶解混匀,4.9 衍生化试剂（10 mmoL/L）：向装有15.1 mg 2-硝基苯甲醛的试剂瓶中加10 mL 甲醇溶解混匀,4.10 试剂盒提供试剂包括：抗体预包被的96 孔板，AOZ 标准溶液、AOZ 抗体工作液、底物显色剂、酶,标记物、反应终止液、浓缩复溶液、洗涤缓冲液,4.11 刻度移液管：10 mL,4.12 洗耳球,4.13 玻璃试管：10 mL,DBS22/008—2013,2,4.14 聚苯乙烯离心管：2 mL、50 mL,5 仪器与设备,5.1 酶标仪或酶联免疫分光光度计(450 nm),5.2 天平：感量0.01 g,5.3 洗板机,5.4 旋转蒸发仪/氮气吹干装置,5.5 均质器,5.6 振荡器,5.7 涡旋仪,5.8 离心机（4000r/min）,5.9 微量移液器：单道 20 μL～200 μL、100 μL～1000 μL、多道 250 μL,6 测定方法,6.1 制备与保存,6.1.1 抽样：按SC/T 3016-2004 的方法进行,6.1.2 样品经处理后，取可食部分（苗种取全身）100 g，用均质器捣碎，装入样品袋，标明标记，放,入-18℃冰柜中冷冻保存,6.2 提取、纯化,6.2.1 称取 1.0±0.05 g 的均质物（鱼/虾）至50 mL 聚苯乙烯离心管中，加入4 mL 水，0.5 mL 1 mol/L,盐酸溶液（4.7）和100 μL 衍生化试剂（4.9），充分振荡 2 min；在60℃孵育3 h；,6.2.2 分别加入5mL 0.1 mol/L 磷酸氢二钾溶液（4.6），0.4 mL 1 mol/L 氢氧化钠（见4.8）和5 mL,乙酸乙酯，剧烈振荡30 s；3000 r/min ，温度20℃～25℃离心10 min；,6.2.3 取出2.5 mL 上层有机相至10 mL 玻璃试管中，50℃～60℃水浴氮气流下吹干；用1 mL 正己烷,溶解干燥物，用1 mL 复溶液工作液（4.10）充分混合;高脂肪样本，可加大正己烷用量，用3 mL 正己,烷溶解干燥物。在室温下（20℃～25℃）3000 r/min 离心10 min；除去上层有机相，取50 μL 下层水,相用于分析,6.3 测定,6.3.1 将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20℃～25℃）平衡30 min 以上，注意每种液体试,剂使用前均须摇匀,6.3.2 取出需要数量的微孔板，将不用的微孔板放入自封袋，保存于2℃～8℃,6.3.3 将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2 孔平行，并记录标准孔和样本孔所,在的位置,6.3.4 加标准品/样本和抗体工作液：加标准品/样本 50 μL 到对应的微孔中，然后加入抗体工作液 50,μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应30 min,6.3.5 洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液（4.10）250 μL/孔，充分洗涤4～5,次，每次间隔10 s，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）,DBS22/008—2013,3,6.3.6 加酶标二抗：加入酶标二抗工作液100 μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置 25℃避光环,境中反应 30 min，取出重复洗板步骤6.3.5,6.3.7 显色：先后加入两种底物液各50 μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置 25℃避光环境中,反应15 min,6.3.8 测定：加入终止液50 μL/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450 nm，在5 min 内读完数据,测定每孔OD 值,7 结果计算,标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的……
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